猪圆环病毒感染的病因及诊断方法

时间:2020-01-22 来源:www.adxplorer.com.cn

猪圆环病毒分为1型和2型。目前,还没有证据表明猪圆环病毒1型能引起猪的疾病,但是它在PK-15细胞中的广泛污染和猪群中的高感染率引起了人们的极大关注。猪圆环病毒2型的危害在于它会损害被感染猪的免疫功能。这种病毒可以导致免疫抑制,但经常被忽视,因为它经常以亚临床感染的形式出现。为了更好地控制猪圆环病毒的感染,迫切需要找到合适的快速准确的诊断方法。然而,在临床诊断和实验室诊断过程中,单一的诊断方法往往受到许多因素的影响。因此,有必要分析目前检测猪圆环病毒的各种方法的优缺点,结合各种方法优化检测方法,为寻找合适的快速准确的诊断方法、制定合理的免疫程序和开发新的诊断方法提供参考。

猪圆环病毒(PCV)属于圆环病毒科和圆环病毒属,是一种单负链环状脱氧核糖核酸病毒。病毒颗粒直径为14纳米~25纳米,具有二十面体对称结构,无包膜,是兽医已知的最小病毒之一。根据其致病性、抗原性和核苷酸序列,可将五氯苯甲醚分为五氯苯甲醚-1型和五氯苯甲醚-2型。1991年,加拿大出现了最早的由五氯苯甲醚引起的疾病报告。这是由PCV-2引起的断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)。到1994年,PMWS已经变得普遍。法国、美国、西班牙、北爱尔兰和日本相继报告了这种疾病的发生。此后,韩国、意大利、德国、丹麦、荷兰、墨西哥等国家也证实了这种疾病的存在。尽管中国自2000年以来已有猪圆环病毒感染的报道,但猪血清中猪圆环病毒2型(PCV-2)抗体的回顾性检测和猪组织样本的回顾性检测结果表明,至少自1969年以来猪体内就存在PCV-2抗体。临床上,猪的PCV-1感染非常普遍。一般认为,猪和猪传代细胞系中普遍存在PCV-1感染。由于其非致病性,无法确定PCV-1感染是由临床症状还是病理诊断引起的。然而,PCV-2与猪发生的各种疾病有关,并具有相应的临床症状和病理表现。临床上,PCV-2主要引起PMWS病、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和A2型先天性震颤。PCV-2可与猪细小病毒(PPV)、猪流感病毒(SIV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等病原体混合,从而增强致病性。本文综述了猪圆环病毒诊断方法的研究进展,以供参考。

1猪圆环病毒感染的临床诊断

猪感染PCV-2主要表现为进行性消瘦、生长迟缓、采食量减少、粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗粗躺下或睡觉时,震颤消失。外部刺激会导致或加剧震颤。在整个生长发育时期,一些震动不断发生。猪的PCV-2感染引起的PDNS的临床症状通常是圆形或不规则的皮肤隆起,黑色病灶位于红色或紫色的中心。

2猪圆环病毒感染的病理诊断

猪感染PCV-2后,最显着的尸检病变是全身淋巴结增大,尤其是腹股沟淋巴结、纵隔淋巴结、肺门淋巴结、肠系膜淋巴结和下颌淋巴结增大2-5倍,有时高达10倍。肺部肿胀、坚硬或像橡胶一样,在某些情况下形成实性和致密的病变。在严重病例中,肺泡出血、紫棕色肺、某些肺尖和心脏叶萎缩或实质性病变;半数病例为轻度至中度肝萎缩和杂色肝。肝小叶间结缔组织明显增生;脾脏经常变大,像肉一样变化。肾脏有斑点,水肿,灰白色,有时包膜下有白色坏死灶。胃食管粘膜水肿和非出血性溃疡;回肠和结肠段肠壁变薄,盲肠和结肠粘膜充血和出血。此外,由继发性感染引起的胸膜炎、腹膜炎、心包炎(心包内大量炎性渗出物)和关节炎也经常可见。当在猪中发现系统性淋巴结病、不完全肺变性或实体和致密病变时,应怀疑PCV-2感染。如果组织病理学检查显示全身淋巴组织中的淋巴细胞减少,单核巨噬细胞浸润并形成多核巨细胞,并且在这些细胞中观察到嗜碱性或两性细胞质包涵体,则诊断可以基本得到确认。实验室诊断

3猪圆环病毒感染

3.1

电子显微镜

电子显微镜技术可用于直观、准确地鉴别病毒。根据病毒的不同特征,如形状、结构和大小,可以立即进行诊断。史蒂文森首次在透射电镜下观察了连续感染PCV-2的PK-15细胞中PCV-2的超微结构,并详细描述了细胞血浆和细胞核中病毒包涵体和病毒颗粒的形态。郎洪武在病猪脾脏和淋巴结组织超薄切片中观察到大量直径为17 nm的圆形无包膜病毒颗粒。

3.2

免疫组织化学检测技术

Sorden等人用纯化的PCV-2抗原免疫兔,获得兔抗PCV-2高免疫血清。该高免疫血清与石蜡包埋组织中福尔马林固定的PCV-2抗原结合,然后生物素标记的抗兔二抗与兔血清结合,最后用过氧化物酶标记的链霉素染色。他们用这种方法在阳性细胞中发现大量染色紧密的圆形结构,其大小和形状与包涵体相似。Chianini等人还利用兔抗PCV-2阳性血清建立了免疫组织化学检测。Magar等人为了克服内源性过氧化物酶对检测结果的影响,将过氧化物酶标记的二级抗体改为免疫胶体银标记,取得了较好的检测结果。

3.3

免疫荧光

免疫荧光试验(IFA)可用于多囊病毒的抗体检测和抗原组织定位。艾伦(Allan)用免疫荧光检测PCV,即用盖玻片在PK-15细胞中培养组织病变材料,用丙酮固定,细胞培养中兔抗PCV高免疫血清与PCV反应即可检测并分型PCV。崔尚进等人[1]将接种有PCV-2的PK-15细胞分散,并通过多次传代到96孔细胞培养板上,制备抗原诊断板,以检测血清中针对PCV-2的抗体。目前,IFA被普遍认为是一种快速、灵敏、低成本的PCV-2实验室检测方法,但操作复杂,不适合快速临床诊断。

3.4

酶联免疫吸附试验诊断方法

酶联免疫吸附试验(酶联免疫吸附试验)可以检测抗体和抗原,灵敏、简单、快速。用沃克竞争酶联免疫吸附法检测人巨细胞病毒2型抗体,检测率为99.58%。Allan等人还建立了抗原捕获酶联免疫吸附试验,使用单克隆抗体检测PCV-2特异性抗体。春梅等人[2]建立了利用PCV-2-ORF2基因原核表达产物的酶联免疫吸附检测方法。崔尚进等人[3]利用重组杆状病毒表达的PCV衣壳蛋白作为酶联免疫吸附试验抗原,提高了辣根过氧化物酶标记二抗的稀释率,降低了背景非特异性。林燕兴等人[4]建立了一种利用原核表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白的间接酶联免疫吸附试验。张小勇等人[5]利用毕赤酵母高效表达多囊病毒而建立

原来日本人的寿司是中国古代人的正餐